酶切位点怎么选择
更新时间: 2024-06-03 21:45:53
酶切位点的距离太小(小于10bp),影响限制性内切酶对切点的识别,不利于空载体的双酶切。
方法:
1、一般目的基因用于克隆表达的情况下,酶切位点的选择要考虑到:目的基因片段内部不含有所选的酶切位点(不然鉴定阳性重组子双酶切时会将目的基因切断)
2、实验后继应用的所有载体(真核、原核、酵母、昆虫)都尽可能含有所选的酶切位点.并且要保证在载体上的插入方向正确(定向克隆)。(不然换载体表达时,还要重新设计引物,以引进新的酶切位点。)
3、尽可能选比较常用的酶切位点。
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