原生质体融合原理

一)原生质体融合原理

两个具有不同遗传性状的细胞，采用适宜的水解酶溶解细胞壁后，在自发情况或融合剂作用下，两个原生质体接触，融合成为异核体，经过繁殖复制进一步核融合，形成杂合二倍体，再经过染色体交换产生重组体，达到基因重组的目的，并在适宜的条件下再生出细胞壁，对重组体进行生产性能、生理生化和遗传特性分析获得所需重组子。

其中，细胞在用酶分离原生质体过程中发生的原生质体自然融合现象又称自发融合；而分离原生质体以后，通过加入诱导剂或利用其他方法诱导不同亲本原生质体发生融合的过程又称诱导融合。理版论上讲原生质体融合可在包括种内、种间、属间、科间甚至是界间的任何原生质体间进行，它不仅可以突破物种间的生殖隔离，创造远缘杂种；还可以使双亲的细胞质基因结合在一起，从而达到改良由胞质基因控制的性状的目的权。

二)原生质是什么

原生质是细胞内生命物质的总称。它的主要成分是糖类、蛋白质、核酸、脂质等。原生质分化产生细胞膜、细胞质和细胞核，构建成具有特定结构体系的原生质体即细胞。普遍认为原生质并非单一的某种或某些化合物，而是由多种化合物所组成的复杂的胶体，其中水含量很高，往往占细胞总重量的绝大部分。这种胶体具有不断自我更新能力，成为一种生命物质的体系，换言之原生质是构成细胞的生命物质。

三)如何判断原生质体制备是否成功?

1、根据形态待征判断其活力：原生质体呈绿色（若来源于叶片）及圆而鼓者为活原生质体。

2、荧光染料活体染色法：荧光素染料可自由透过细胞膜，在细胞内被酯酶水解为荧光素，后者不能自由透过细胞膜而滞留于细胞内，在荧光显微镜下根据荧光强度即可判断原生质体死活。

3、酚藏花红染色法：活原生质体能吸收呈红色，无活性的则不能吸收而无色。

四)原生质体纯化主要有哪些方法

原生质体纯化的方法：

1、沉降法：最常用的方法，将过滤和离心相结合。置于离心管离心，原生质体沉于离心管底部，残液碎屑悬浮于 上清液。去上清液后， 再把沉淀物重新悬浮于清洗培养基中反复3次；

2、漂浮法：根据原生质体来源不同，利用比重大于原生质体的高渗蔗糖溶液，离心后使原生质体漂浮其上， 残渣碎屑沉到管底；

3、界面法：利用两种比重不同的溶液，使健康和完整的原生质体处于两液相的界面之中。

五)原生质层包括细胞核吗

不包括。原生质层指成熟植物细胞细胞膜与液泡膜及其之间的细胞质，细胞核不属于细胞质，故不包括。原生质是动植物细胞都具有的，而原生质层仅存在于成熟的植物细胞中。

什么是原生质层原生质层，指的是成熟植物细胞的细胞膜、液泡膜和介于这两层膜之间的细胞质。其包括细胞膜，细胞质，液泡膜。原生质层的选择透过性是生理特性，只有活细胞才具有，细胞死了，原生质层就变成完全通透性，水和溶质都可以自由透过。

细胞核分布绝大多数真核生物细胞中；

（1）原核细胞中没有真正的细胞核(称为拟核）；

（2）有的真核细胞中也没有细胞核，如哺乳动物的成熟的红细胞，高等植物成熟的筛管细胞等极少数的细胞。